概述：甜美素是食物出产中常用的甜味增添剂，其甜度是蔗糖的30～40倍,节制限量对人们的身材安康有首要意思。《GB 2760-2014 食物增添剂利用规范》顶用于界定食物增添剂利用规模的食物分类体系，白酒属于蒸馏酒，不许可利用甜美素。本体例参照GB/T 5009.97-2003及相干文献资料，对白酒中的甜美素经提取后，在冰浴前提下，与亚硝酸钠产生重氮化反映天生衍生物环己醇亚硝酸酯，衍生物进入气相色谱质谱联用仪停止分手检测。
1 尝试局部
1.1 仪器与试剂
江苏天(tian)瑞仪器股分(fen)无限(xian)公司气相色谱(pu)-质谱(pu)联用仪：GC-MS 6800
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甜美素规范储蓄溶液：称取必然量的甜美素规范品（纯度为99.0％）于枯燥容量瓶中，用水配成1000mｇ/kg规范储蓄溶液。
试剂均为优级纯，尝试用水为二次蒸馏水。
1.2 仪器任务前提
1.2.1
气相色谱前提
DB-5毛细管色谱（30m ×0.25mm,0.25um）；载气：氦气（纯度为99.999％），载气流量1.0mL/min；进样口温度250℃，进样量1.0uL，进样体例为分流进样,分流比10:1；法式升温：初始温度为40℃，坚持时候10min，以25℃/min速度升至270℃，坚持时候5min。
1.2.2
质谱前提
电子轰击离子源（EI），四级杆温度150℃，接口温度280℃；收罗体例为挑选离子监测扫描（SIM），溶剂提早时候6min,挑选3个监测离子质荷比（m/z）为55,81,83。
1.3 尝试体例（略）
2 成果与会商
2.1 特点和离子的挑选
甜美素的首ﷺ要衍生(sheng)物环(huan)己(ji)醇亚硝酸(suan)酯作为定(ding)性(xing)和定(ding)量，如图(tu)(tu)1。保留时候(hou)8.511min.定(ding)性(xing)离子(zi)（m/z）为55,81,83。定(ding)量离子(zi)为55。质(zhi)谱图(tu)(tu)见图(tu)(tu)🌼2.
图1、甜蜜素并衍生物在总阴离子流色谱图
Figu♛re 1、 Cyclamate derivatives total ion
chromatogram
图2、可爱(ai)素衍化物的质谱(pu)图
Figure 2、 Cyclamate derivative spectrum
图3、甜甜的(d💝e)素(su)衍化(hua)物在SIM扫(sa♌o)描机下的(de)铁离子流色谱图
Figure 3、 Cyclamate
derivative SIM under scanning ion๊ chromatogram
图4、柔美素延伸物在SIM扫描仪扫描下的(de)质谱(pu)图
Figure 4、 Cyclamate derivati🌊ve🌜 SIM
under scanning spectrum
2.2 前处置前提挑选
2.2.1 繁衍阶段选定
精确吸收的1ml甜美素储蓄液溶液根据上述衍生步骤停止衍生化，甜美素衍生物浓度为200ug/mL，衍生反映时候别离设置为10min、20min、30min、40min、50min，考查反映时候对反映的影响。成果标明，跟着时候从10min升至30min，衍生物旌旗灯号呼应值逐步增添，跟着反映时候的耽误，呼应值反而呈现下降，是以，衍生反映温度30min最好。
2.2.2
硫酸浓度的挑选
精确吸收的1mL甜美素储蓄液溶液根据上述衍生步骤停止衍生化，甜美素衍生物浓度为200ug/mL，冰浴反映前提下，插手50g/L的亚硝酸钠和别离为50g/L，75g/L，100g/L，125g/L，150g/L。成果标明，酸度从50g/L至100g/L，反映衍生物旌旗灯号呼应值较着增添，浓度降低时，呼应值呈现削减，是以，终究衍生反映酸度为100g/L。
2.2.3 亚硝酸钠浓度对衍生反映的影响
精确吸收的1ml甜美素储蓄液溶液根据上述衍生步骤停止衍生化衍生化，甜美素衍生物浓度为200ug/mL，冰浴反映前提下，插手100g/L的硫酸，和别离为30g/L，50g/L，70g/L，90g/L亚硝酸钠。成果标明，酸度从30g/L至50g/L，反映衍生物旌旗灯号呼应值较着增添，浓度降低时，呼应值呈现削减，是以，终究亚硝酸钠衍生反映为50g/L。
3 尝试数据
3.1 精密度和反复性尝试
精确移(yi)取储(chu)蓄液500uL于离心管中(zhong)，用水定容(rong)20mL根据上述标样衍生步骤停(ting)止衍生化，衍生物(wu)浓(nong)度(du)为100ug/mL，平行制(zhi)备反映液6次(ci)，用GC-MS测(ce)定。考(kao)查衍生体例的重现性和组分保留时(shi)候和峰(feng)面积的绝对规范误差，6个平行样的谱。成果标明，保留时(shi)候RSD为0.98%，峰(feng)面积RSD为6.00%,，具💮体尝(chang)试数(shu)据以下表1所示 。
表1、反反复复性测验工作成果
Table 1, repeatable test results
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试样微章
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选择之前
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删去期间RSD%
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峰体积
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峰平数RSD%
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1
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8.611
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0.98%
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96798
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6.00%
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2
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8.518
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99549
|
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3
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8.406
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105518
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4
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8.431
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99798
|
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5
|
8.411
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87708
|
|
6
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8.410
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96500
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3.2 线性干系和检测限
精确吸收浓度为10ug/mL的甜美素规范溶液10ul于50ml离心管中对应衍生物浓度别离为2ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、100ug/mL、200ug/mL，根据上述标样衍生化步骤停止衍生化，停止线性测试。尝试所得线性方程为：y=940.43x-3525.57，线性相干系数为0.9984，如图5所示。
图5. 线性干系图
Figure 5，Linear
3.3 收受接管率测试
挑选2mg/kg、50mg/kg、200mg/kg的标样增添浓度，对某品牌白酒停止收受接管率尝试，每一个浓度别离做三次平行样，按处置样品的体例处置加标后的样品并测试，接纳外标法定量，测试成果以下表2所示。
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氧浓度/mg/kg
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收受(shou)交接率(lv)1/%
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收受(shou)收回(hui)率(lv)2/%
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收受(shou)对接率(lv)3/%
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粗(cu)糙收受(shou)对接(jie)率/%
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2
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109.6
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104.7
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107.7
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107.3
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50
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99.84
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113.7
|
103.5
|
105.7
|
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200
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108.3
|
114.9
|
116.7
|
113.3
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表2、收受接管率测试成果
Table 2, the recovery test results
3.4 现实样品测试
根据上述(shu)样(yang)品处(chu)置(zhi)体例对差别(bie)品类(lei)的白酒样(yang)品停(ting)止前处(chu)置(zhi)和(he)衍生化，利用GC-MS6800停(ting)止测试(shi)，测试(shi)成(cheng)果以下表3所(suo)示(shi)🐠：
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样板
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清纯(chun)素(su)成分(fen)/mg/kg
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酒(jiu)产品的(de)样品1
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N.D.
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酒样品管(guan)理2
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N.D.
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酒备(bei)样3
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N.D.
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酒样件4
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N.D.
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酒原材料(liao)5
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N.D.
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注：“N.D”表现“未检出”
表3.、酒中甜美素含量测试成果
4 论断
本尝试接纳GCMS-6800，在SIM扫描形式下对酒中的甜美素停止测试和阐发，体例不变靠得住，线性规模好，活络度高，受杂质峰的搅扰小，可以或许有用地对酒中的甜美素停止定性定量阐发。
